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點擊次數(shù)：17010 發(fā)布時間：2022/12/26 11:57:39
一、樣品預(yù)處理
1．準(zhǔn)備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定 100 至 500 毫克組織重量
2．（選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管
3．（選擇步驟）加入 xx 毫升清理液（Reagent A）清洗 1 次
4．即刻用刀片切碎組織
5．放進(jìn)一個預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管
6．加入預(yù)冷的 xx 毫升裂解液（Reagent B）
7．渦旋震蕩 5 秒，充分混勻
8．即刻放進(jìn)預(yù)冷的 DOUNCE 勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約 80 下）
9．將所有組織勻漿物移入 15 毫升錐形離心管，放進(jìn) 4℃臺式離心機(jī)離心 10 分鐘，速度為 10000g
10．小心移出上清液到新的 15 毫升錐形離心管
11．移取 10 微升進(jìn)行蛋白定量檢測（注意：建議使用 Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－G&VS30030.1）
12．放進(jìn)冰槽里備用或放入—70℃冰箱里保存
二、 測定準(zhǔn)備
1． 設(shè)定好分光光度儀（溫度為 4℃）：波長 500nm，并置零
2． 準(zhǔn)備好 5 個 15 毫升錐形離心管，標(biāo)記為 1 至 5 號管
3． 分別加入 xx 毫升預(yù)冷的清理液（Reagent A）到每個離心管
4． 移取 xx 毫升預(yù)冷的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）到 1 號管，混勻
5． 小心移取 xx 毫升 1 號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）到 2 號管，混勻
6． 小心移取 xx 毫升 2 號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）到 3 號管，混勻
7． 小心移取 xx 毫升 3 號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）到 4 號管，混勻
8． 將 1 至 5 號管放進(jìn)冰槽里備用；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表管號
清理液（Reagent A） 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F） 標(biāo)準(zhǔn)精氨酸含量
1 xx 毫升 xx毫升 50微克/毫升
2 xx 毫升 xx毫升 1號管25微克/毫升
3 xx 毫升 xx毫升 2號管12.5微克/毫升
4 xx 毫升 xx毫升 3號管 6.25微克/毫升
5 xx 毫升 空對照 0
三、 標(biāo)準(zhǔn)曲線測定
1． 移取 xx 毫升上述制備的標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）到新的 15 毫升錐形離心管
2． 加入 xx 微升反應(yīng)液（Reagent C），混勻
3． 加入 xx 微升堿性液（Reagent D），混勻
4． 置于冰槽里孵育 10 分鐘3
5． 加入 xx 毫升冰槽里預(yù)冷的顯色液（Reagent E）
6． 快速槍頭混勻（注意：顯示磚紅色）
7． 即刻移取 3 毫升到預(yù)冷的比色皿
8． 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測（500nm 波長），獲得吸光讀數(shù)（OD）（注意：須在 10 秒之內(nèi)測讀）
9． 重復(fù)實驗步驟 1 至 8 四次
10．實際吸光讀數(shù)：標(biāo)準(zhǔn)樣吸光讀數(shù)－5 號管標(biāo)準(zhǔn)樣吸光讀數(shù)（作為空對照）
11．構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y 軸）為實際吸光讀數(shù)（OD）；橫座標(biāo)（X 軸）為標(biāo)準(zhǔn)精氨酸含量（微克/毫升）
四、 樣品測定
1． 移取 2.5 毫升上述制備的待測樣品到新的 15 毫升錐形離心管
2． 加入 xx 微升反應(yīng)液（Reagent C），混勻
3． 加入 xx 微升堿性液（Reagent D），混勻
4． 置于冰槽里孵育 10 分鐘
5． 加入 xx 毫升冰槽里預(yù)冷的顯色液（Reagent E）
6． 快速槍頭混勻（注意：顯示磚紅色）
7． 即刻移取 3 毫升到預(yù)冷的比色皿
8． 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測（500nm 波長），獲得吸光讀數(shù)（OD）（注意：須在 10 秒之內(nèi)測讀）
9． 實際吸光讀數(shù)：樣品吸光讀數(shù)－5 號管標(biāo)準(zhǔn)樣吸光讀數(shù)（作為空對照）
10．根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)精氨酸含量（微克/毫升）
五、 計算樣品實際含量
注意事項
1． 本產(chǎn)品為 20 次操作
2． 本產(chǎn)品檢測范圍 0 至 50 微克
3． 操作時，須戴手套
4． 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
5． 整個操作須在冰上操作
6． 樣品測定避免批量一次操作，尤其是加入顯色液（Reagent E）
7． 系統(tǒng)操作過程中，標(biāo)準(zhǔn)樣品測定只需 1 次
8． 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品量
9． 用戶可以使用：微克精氨酸/毫克蛋白或微克精氨酸/毫克組織等
10．本公司提供系列生化學(xué)檢測試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感
產(chǎn)品編號 名稱 規(guī)格
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G&VS19012.2 細(xì)胞精氨酸（arginine））含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒 20 次
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原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司
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