二抗的選擇方法

點擊次數(shù)：17962 發(fā)布時間：2016/7/19 10:48:22

一、關(guān)于二抗的介紹：

二抗：廣義上是指專門用來和一抗進(jìn)行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體，在免疫學(xué)反應(yīng)中，經(jīng)常需要針對試驗選擇不同的二抗。

檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可以選擇，同時在后續(xù)試驗中也會有不同的檢測方案，因此在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型和后續(xù)檢測方案的要求，一般來說，選擇合適的二抗需要從以下幾方面考慮：

1、一抗的種屬來源

二抗應(yīng)選用與使用的一抗的物種來源，如一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選用抗小鼠的二抗；如一抗是兔血清制備的多抗，則選用抗兔的二抗。

2、一抗的類別亞型

二抗需要與一抗的類別或亞型匹配，通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體，如果一抗是小鼠IgM，那么二抗相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgM。

3、二抗的種屬來源

一般來說，不同種屬來源與二抗的質(zhì)量沒有必然的聯(lián)系，來源于山羊的二抗與來源于驢的二抗在一般的實驗里沒有太多的差別，然而在雙標(biāo)試驗中，如果其中一個一抗是山羊來源的，一個是小鼠來源的，則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗，這時候，二抗就不能選擇山羊或小鼠來源的。

4、二抗的偶聯(lián)標(biāo)記

一般來講，偶聯(lián)到二抗的探針主要有酶，熒光基團(tuán)，生物素，金顆粒。選用哪種探針的二抗取決于具體的實驗，對于Western blot和ELISA，*常用的二抗是酶標(biāo)二抗；而細(xì)胞或組織標(biāo)記實驗中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗。

5、是否血清吸附過

如果您的檢測樣本室人源的蛋白，一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗就要選擇抗小鼠源的二抗，如果對實驗特異性要求很高，那么推薦用人血清吸附過的抗小鼠的二抗，這種二抗由于經(jīng)過人血清吸附而排除了與人源組織可能發(fā)生非特異性反應(yīng)的IgG，因此非特異性結(jié)合降低到。

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