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技術(shù)文章

豬口蹄疫病毒(FMDV)試劑盒(ELISA)使用說明書

點擊次數(shù):17673   發(fā)布時間:2016/9/13 8:31:18

 豬口蹄疫病毒(FMDV)試劑盒(ELISA

使用說明書

貨號: SU-B50161

l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中豬口蹄疫病毒(FMDV)的含量。

有效期:6個月

保存條件:2-8℃  

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被豬口蹄疫病毒(FMDV)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬口蹄疫病毒(FMDV)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣本處理及要求

1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 -8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。注:標本溶血會影響*后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標儀(450nm

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL2-20uL20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

8×12

8×6

標準品

0.3mL*6

0.3mL*6

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

說明書

1

1

自封袋

1

1

 

備注:

1.  標準品濃度依次為:160、80、40、20、10、5pg/ml

2.  經(jīng)過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

注意事項

1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

 

9. 不能使用過期產(chǎn)品。

10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

試劑準備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按120稀釋,即120×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6. 每孔加入底物A、B50μL37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

實驗結(jié)果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

試劑盒性能

1. 檢測范圍:5pg/ml160pg/ml

2. 靈敏度:檢測濃度小于1.0pg/ml。

3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

4. 重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%

 

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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