本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
豬萎縮性鼻炎抗原（atrophicrhinitis）ELISA 檢測(cè)試劑盒
使用說(shuō)明書(shū)
檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被豬萎縮性鼻炎抗原（atrophicrhinitis）捕獲抗體的包被微孔 中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底 洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并 在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬萎縮性 鼻炎抗原（atrophicrhinitis）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng) 下測(cè)定吸光度（OD 值），判斷樣品是否含有豬萎縮性鼻炎抗原 （atrophicrhinitis）。
豬萎縮性鼻炎抗原（atrophicrhinitis）ELISA 檢測(cè)試劑盒-免費(fèi)代測(cè)-威生物
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì) 胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心 地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘 取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按次用量分裝，凍存 于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
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操作注意事項(xiàng)
1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的 濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解 后再使用。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保 存。
3. 預(yù)處理后的樣本無(wú)需稀釋?zhuān)苯尤?10μL 加樣即可。
4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5. 所有液體組分使用充分搖勻。
試劑盒組成
名稱(chēng) 96 孔配置 48 孔配置 備注
微孔酶標(biāo)板 96 孔 48 孔 無(wú)
陰性對(duì)照 0.3mL 0.3mL 無(wú)
陽(yáng)性對(duì)照 0.3mL 0.3mL 無(wú)樣本稀釋液 6mL 3mL 無(wú)
檢測(cè)抗體-HRP 10mL 5mL 無(wú)
20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物 A 6mL 3mL 無(wú)
底物 B 6mL 3mL 無(wú)
終止液 6mL 3mL 無(wú)
封板膜 2 張 2 張 無(wú)
說(shuō)明書(shū) 1 份 1 份 無(wú)
自封袋 1 個(gè) 1 個(gè) 無(wú)
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按 1：20 稀釋?zhuān)?1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
洗板方法
1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。
2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
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操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各 50μL；
3. 待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；
4. 隨后陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD 值。
結(jié)果判斷
1.試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔 OD 值平均值≥1.00；陰性對(duì)照孔 OD 值平均值≤0.15。
2.臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
3.陰性判斷：樣品 OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性
4.陽(yáng)性判斷：樣品 OD 值＞臨界值（Cut off），樣品為陽(yáng)性
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性：陽(yáng)性對(duì)照孔 OD 值平均值≥1.00；陰性對(duì)照孔 OD 值平均值≤0.15，說(shuō)明試驗(yàn)結(jié)果有效。
2. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。
4. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
5. 有效期：6 個(gè)月
免責(zé)聲明
1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。
原創(chuàng)作者：上海極威生物科技有限公司
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王小姐
