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點(diǎn)擊次數(shù):16662 發(fā)布時(shí)間:2023/10/31 21:04:49
主要用途
活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)熒光測(cè)定試劑是一種旨在通過(guò)透膜熒光染色劑二氯熒光乙酰乙酸鹽,在組織氧化損傷條件下,產(chǎn)生熒光,來(lái)定量檢測(cè)組織內(nèi)活性氧族的生成和增加的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適宜于活體動(dòng)物組織的分析。可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、衰老、代謝和營(yíng)養(yǎng)學(xué)等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)易,活體檢測(cè),性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
超氧自由基陰離子(superoxide radical;O2-)、過(guò)氧化氫(hydrogen peroxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基(hydroxyl radical;OH-)、過(guò)氧化基(peroxyl radical;ROO-)、氫過(guò)氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxyl radical)、氮氧基(nitric Oxide;NO-)、過(guò)氧亞硝基陰離子(peroxynitrite anion;ONOO-)次氯酸(hypochlorous acid;HOCl)、半醌自由基(semiqui radical)、單線態(tài)氧氣(singlet oxygen)等細(xì)胞內(nèi)活性氧族(Reactive Oxygen Species;ROS)的產(chǎn)生和增多,將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡。2',7'-二氯熒光乙酰乙酸鹽(2',7'-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)一種wan全自由通過(guò)細(xì)胞膜的染色劑。一旦被過(guò)氧化氫、過(guò)氧化基、過(guò)氧亞硝基陰離子等氧化,便產(chǎn)生綠色熒光。據(jù)此測(cè)定組織細(xì)胞內(nèi)活性氧族的濃度。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液(Reagent A) 毫升
染色液(Reagent B) 毫升
稀釋液(Reagent C) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
保存方式
保存染色液(Reagent B)在-20℃冰箱里,嚴(yán)格避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效bao證6月
用戶(hù)自備
50毫升錐形離心管:用于組織收集的容器
15毫升錐形離心管:用于工作液配制和組織處理的容器
1.5毫升離心管:用于工作液配制的容器
6孔細(xì)胞培養(yǎng)板:用于組織染色的容器
培養(yǎng)箱或恒溫水槽:用于染色孵育
熒光顯微鏡:用于觀察熒光組織
96孔板:用于熒光檢測(cè)的容器
熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀:用于組織熒光定量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)步驟
方法一:新鮮組織薄片定性檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent B)置入冰槽里融化,稀釋液(Reagent C)放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出xx微升染色液(Reagent B)到新的15毫升錐形離心管,加入xx毫升稀釋液(Reagent C),混勻后,將染色工作液置入暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
1. 手術(shù)取出動(dòng)物組織
2. 放進(jìn)預(yù)冷的50毫升錐形離心管
3. 加入xx毫升清理液(Reagent A)浸泡15秒
4. 用鑷子取出組織,用無(wú)菌綿紙吸干
5. 即刻用刀片切離組織為1cm X 1cm大小的片狀組織
6. 用鑷子將組織薄片放進(jìn)6孔培養(yǎng)板的一個(gè)孔
7. 加入xx毫升含有染色液(Reagent B)和稀釋液(Reagent C)的染色工作液
8. 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱孵育20分鐘,避免光照(注意:如果組織薄片較厚,可以增加孵育時(shí)間至60分鐘)
9. 小心抽去染色工作液
10. 加入xx毫升清理液(Reagent A)
11. 用鑷子將組織薄片放在載玻片上
12. 壓片
13. 即刻在熒光顯微鏡下觀察(定性檢測(cè)):激發(fā)波長(zhǎng)490nm,散發(fā)波長(zhǎng)520nm――綠色熒光增強(qiáng),表明活性氧族(ROS)含量高
方法二:組織勻漿定量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent B)置入冰槽里融化。移取xx微升稀釋液(Reagent C)到新的1.5毫升離心管,放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱,然后加入10微升染色液(Reagent B),混勻后,將染色工作液置入暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
1. 手術(shù)取出動(dòng)物組織,并秤重以確定組織重量
2. 移取1克組織,放進(jìn)預(yù)冷的50毫升錐形離心管
3. 加入xx毫升的清理液(Reagent A)
4. 用鑷子取出組織,用無(wú)菌綿紙吸干
5. 即刻用刀片切碎組織
6. 放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
7. 加入xx毫升預(yù)冷的稀釋液(Reagent C)
8. 渦旋震蕩5秒,充分混勻
9. 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
10. 在冰槽里用研磨棒勻化組織(注意:切莫過(guò)度勻化)
11. 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
12. 置入冰槽里備用
13. 移取5微升組織勻漿物進(jìn)行蛋白定量檢測(cè):建議使用 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒(G&VS30030.1)
14. 移取xx微升組織勻漿物(樣品)或xx微升稀釋液(Reagent C)(背景對(duì)照)到1毫升石英比色杯里
15. 加入xx微升升含有染色液(Reagent B)和稀釋液(Reagent C)的染色工作液
16. 上下傾倒混勻
17. 放進(jìn)37℃恒溫水槽孵育20分鐘,避免光照
18. 即刻放進(jìn)熒光分光光度儀檢測(cè):激發(fā)波長(zhǎng)490nm,散發(fā)波長(zhǎng)520nm——(樣品RFU-對(duì)照RFU)=實(shí)際RFU:增加,表明活性氧族(ROS)含量高
方法三:組織勻漿微量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent B)置入冰槽里融化,移取xx微升稀釋液(Reagent C)到新的1.5毫升離心管,放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱,然后加入xx微升染色液(Reagent B),混勻后,將染色工作液置入暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
1. 手術(shù)取出動(dòng)物組織,并秤重以確定組織重量
2. 移取200毫克組織,放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
3. 加入xx毫升的清理液(Reagent A)
4. 用鑷子取出組織,用無(wú)菌綿紙吸干
5. 即刻用刀片切碎組織
6. 放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
7. 加入xx毫升預(yù)冷的稀釋液(Reagent C)
8. 渦旋震蕩5秒,充分混勻
9. 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
10. 在冰槽里用勻漿棒勻化組織(注意:約20至40下)
11. 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
12. 置入冰槽里備用
13. 移取5微升組織勻漿物進(jìn)行蛋白定量檢測(cè):建議使用 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒(G&VS30030.1)
14. 移取50微升組織勻漿物(樣品)或xx微升稀釋液(Reagent C)(背景對(duì)照)到96孔板里
15. 加入xx微升升含有染色液(Reagent B)和稀釋液(Reagent C)的染色工作液
16. 放進(jìn)37℃恒溫水槽孵育20分鐘,避免光照
17. 即刻放進(jìn)熒光酶標(biāo)儀檢測(cè):激發(fā)波長(zhǎng)490nm,散發(fā)波長(zhǎng)520nm——(樣品RFU-對(duì)照RFU)=實(shí)際RFU:增加,表明活性氧族(ROS)含量高
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品為20次(1克組織)、100次(200毫克組織)、500次(200毫克組織;96孔板)或40次(組織薄片)操作
2. 建議使用新鮮組織,手術(shù)切除后1小時(shí)內(nèi)的樣品
3. 操作時(shí),須戴手套
4. 孵育時(shí),須避免光照
5. 如果組織薄片較厚,可以增加孵育時(shí)間至60分鐘
6. 組織勻漿時(shí),切莫過(guò)度
7. 建議組織染色完成后,即刻進(jìn)行熒光定量或定性分析
8. 本公司提供陽(yáng)性對(duì)照甲萘醌溶液,觀察組織熒光增強(qiáng)現(xiàn)象
9. 本公司提供系列活性氧檢測(cè)試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰
使用cheng諾
極威生物秉著“信譽(yù)至上、客戶(hù)滿(mǎn)意、質(zhì)量cheng諾”的宗旨為我們的用戶(hù)提供you質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶(hù)收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷(xiāo)售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,bao證說(shuō)明書(shū)所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題,請(qǐng)立即以書(shū)面形式(實(shí)驗(yàn)報(bào)告)與本公司聯(lián)系,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。
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訂購(gòu)信息
單組分訂購(gòu)信息
編號(hào)名稱(chēng)規(guī)格
G&VS10016.4活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒40/100次
G&VS10016.4A清理液(Reagent A)毫升
G&VS10016.4B 染色液(Reagent B)毫升
G&VS10016.4C 稀釋液(Reagent C)毫升
G&VS12041 Menadione Solution(1mM)毫升
試劑盒訂購(gòu)信息
產(chǎn)品編號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 |
G&VS10016.1 | 細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測(cè)定試劑盒 | 20次 |
G&VS10016.2 | 細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)綠色熒光測(cè)定試劑盒 | 100次 |
G&VS10016.3 | 活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測(cè)定試劑盒 | 8/20次 |
G&VS10016.4 | 活體組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)綠色熒光測(cè)定試劑盒 | 40/100次 |
G&VS10016.5 | 冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測(cè)定試劑盒 | 50次 |
G&VS10016.6 | 冰凍切片氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)綠色熒光測(cè)定試劑盒 | 50次 |
G&VS10016.7 | 真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測(cè)定試劑盒 | 20次 |
G&VS10016.8 | 真菌/酵母細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)綠色熒光測(cè)定試劑盒 | 50次 |
G&VS10016.9 | 植物細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測(cè)定試劑盒 | 20次 |
G&VS10016.10 | 植物細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒 | 50次 |
G&VS10016.11 | 體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測(cè)定試劑盒 | 50次 |
G&VS10016.12 | 體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒 | 50次 |
原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司
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