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ELisa實(shí)驗(yàn)顯色和比色的重要性 極威生物

點(diǎn)擊次數(shù):17071   發(fā)布時(shí)間:2021/6/29 19:04:42

 ELisa實(shí)驗(yàn)顯色和比色的重要性 極威生物

 

 

Elisa實(shí)驗(yàn)中,顯色和比色是elisa實(shí)驗(yàn)的后半段,但是這后半段的操作也是不可小視,必須得認(rèn)真的來(lái)做,否則,一樣會(huì)影響實(shí)驗(yàn)效果,關(guān)于顯色和比色,我們來(lái)簡(jiǎn)單了解一下。

TMB 經(jīng)HRP 作用后,約40 分鐘顯色達(dá)頂峰,隨即逐漸減弱,至2 小時(shí)后即可完quan消退至無(wú)色。TMB的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類(lèi)終止劑尚能使藍(lán)色維持較長(zhǎng)時(shí)間(12-24 小時(shí))不褪,是目視判斷的良好終止劑。

此外,各類(lèi)酸性終止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,此時(shí)可用特定的波長(zhǎng)(450nm)測(cè)讀吸光值。酶標(biāo)比色儀簡(jiǎn)稱(chēng)酶標(biāo)儀,通常指專(zhuān)用于測(cè)讀ELISA 結(jié)果吸光度的光度計(jì)。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有:測(cè)讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)que性、重復(fù)性、精que度和可測(cè)范圍、線性等等。

優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可精que0.001,準(zhǔn)que性為±1%,重復(fù)性達(dá)0.5%。酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽(yáng)光或強(qiáng)光照射下,操作時(shí)室溫宜在15~30℃,使用前先預(yù)熱儀器15-30 分鐘,測(cè)讀結(jié)果更穩(wěn)定。

測(cè)讀A 值時(shí),要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰,如OPD 用492nm 波長(zhǎng)。有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)式測(cè)讀,即每孔先后測(cè)讀兩次,第yi次在*適波長(zhǎng)(W1),第二次在不敏感波長(zhǎng)(W2),兩次測(cè)定間不 移動(dòng)ELISA 板的位置,*終測(cè)得的A 值為兩者之差(W1-W2)。雙波長(zhǎng)式測(cè)讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

 

 

 

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