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技術(shù)文章

通用型細(xì)胞核形態(tài)染色/細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒2024年說(shuō)明書(shū)

點(diǎn)擊次數(shù):16644   發(fā)布時(shí)間:2024/2/5 9:44:51

通用型細(xì)胞核形態(tài)染色/細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

主要用途

通用型細(xì)胞核形態(tài)染色/細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)熒光染料與DNA特異性結(jié)合,呈現(xiàn)藍(lán)色,用于分析和觀(guān)察細(xì)胞核形態(tài)或DNA含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞核(動(dòng)物、人體、植物、昆蟲(chóng)等)的觀(guān)察?梢员挥糜诩(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞流式儀分析等研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,熒光清晰,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

赫斯特染料(Hoechst 33258)為特異性 DNA 活性染料,與 A-T 鍵結(jié)合,這種染料對(duì)死細(xì)胞或固著細(xì)胞可立即染色。而活細(xì)胞的著色是漸進(jìn)性的,在 10 分鐘內(nèi)可達(dá)飽和。在熒光顯微鏡下,活細(xì)胞核呈彌散均勻熒光,出現(xiàn)細(xì)胞凋亡時(shí),細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)濃染致密的顆粒塊狀熒光。在紫外光激發(fā)下,呈現(xiàn)明亮的藍(lán)色熒光。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液(Reagent A)         毫升

反應(yīng)液(Reagent B          毫升

染色液(Reagent C          微升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)                           1

保存方式

保存染色液(Reagent C)在-20冰箱里,用鋁箔封裹,避免光照;其余的保存在4冰箱里,有效bao6

用戶(hù)自備

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(G&VS12024):用于細(xì)胞脫離

wan全細(xì)胞培養(yǎng)液(G&VS12052):用于中和胰蛋白酶的處理

15毫升錐形離心管:用于細(xì)胞收集的容器

1.5毫升離心管:用于細(xì)胞染色的容器

微型臺(tái)式離心機(jī):用于細(xì)胞收集的操作

倒置熒光顯微鏡:用于觀(guān)察細(xì)胞核形態(tài)

細(xì)胞流式儀:用于細(xì)胞熒光分析

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,從-20冰箱里取出染色液(Reagent C,置入冰槽里融化。移出xx微升反應(yīng)液(Reagent Bxx微升染色液(Reagent C到新的1.5毫升離心管,混勻后標(biāo)記為染色工作液。然后進(jìn)行下列操作。

一、 直接法

1. 準(zhǔn)備1個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)12孔板的待測(cè)細(xì)胞,每孔鋪滿(mǎn)率達(dá)70%(約30萬(wàn)細(xì)胞數(shù))

2. 小心抽去細(xì)胞培養(yǎng)液

3. 輕輕沿著孔壁加入xx毫升 清理液(Reagent A到細(xì)胞培養(yǎng)孔,覆蓋培養(yǎng)孔表面

4. 小心抽去xx毫升 清理液(Reagent A

5. 加入xx微升含有反應(yīng)液(Reagent B染色液(Reagent C染色工作液 覆蓋培養(yǎng)孔表面

6. 在暗室里室溫下孵育2分鐘

7. 即刻在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察:紫外波長(zhǎng)350nm(細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色)

二、間接法

1. 準(zhǔn)備1個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)12孔板的待測(cè)細(xì)胞,每孔鋪滿(mǎn)率達(dá)70%(約30萬(wàn)細(xì)胞數(shù))

2. 小心移出細(xì)胞培養(yǎng)液到15毫升錐形離心管(收集懸浮細(xì)胞)

3. 加入xx毫升 清理液(Reagent A到細(xì)胞培養(yǎng)孔,覆蓋培養(yǎng)孔表面

4. 小心移出xx毫升 清理液(Reagent A15毫升錐形離心管(收集洗脫細(xì)胞)

5. 加入500微升用戶(hù)自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,鋪滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)孔表面

6. 放進(jìn)37培養(yǎng)箱孵育1分種

7. 輕輕手擊震動(dòng)培養(yǎng)板,使細(xì)胞脫落

8. 加入1毫升用戶(hù)自備的wan細(xì)胞培養(yǎng)液

9. 移入15毫升錐形離心管

10. 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g

11. 小心抽去上清液

12. 加入xx微升清理液(Reagent A

13. 200微升槍頭上下輕柔抽吸,混勻細(xì)胞顆粒群

14. 轉(zhuǎn)入到1.5毫升離心管或細(xì)胞流式儀專(zhuān)用測(cè)試管

15. 加入xx微升含有反應(yīng)液(Reagent B染色液(Reagent C染色工作液

16. 輕度渦旋震蕩2

17. 在暗室里室溫下孵育2分鐘

18. 即刻移取50微升在載玻片上壓片,

19. 在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察:紫外波長(zhǎng)350nm(細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色)

20. 或即刻進(jìn)行細(xì)胞流式儀分析:紫外波長(zhǎng)350nm觀(guān)察50000個(gè)細(xì)胞以上

注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品為100次(8個(gè)12孔細(xì)胞培養(yǎng)板)操作

2. 所有操作均須無(wú)菌狀態(tài)下進(jìn)行

3. 確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性,須收集所有懸浮和貼壁細(xì)胞;同時(shí)要確保足夠的細(xì)胞數(shù)

4. 可用35mm培養(yǎng)皿、6孔培養(yǎng)板或25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶操作,相應(yīng)增加染色液的用量。但12孔培養(yǎng)板為理想選擇

5. 操作時(shí),須戴手套

6. 孵育時(shí),須避免光照

7. 建議細(xì)胞染色完成后,即刻進(jìn)行分析;若暫不觀(guān)察,可保存在4℃冰箱里,但不宜超過(guò)1

8. 細(xì)胞核呈現(xiàn)多個(gè)散在塊狀結(jié)構(gòu),為細(xì)胞凋亡

9. 細(xì)胞流式儀分析前,須混勻內(nèi)容物

10. 細(xì)胞流式儀分析,細(xì)胞檢測(cè)量不得少于10000個(gè)

11. 告知流式儀技術(shù)員有關(guān)細(xì)胞類(lèi)型

12. 本公司提供系列細(xì)胞核染色分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰

使用cheng

極威生物秉著信譽(yù)至上、客戶(hù)滿(mǎn)意、質(zhì)量cheng的宗旨為我們的用戶(hù)提供you質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶(hù)收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷(xiāo)售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,bao說(shuō)明書(shū)所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題,請(qǐng)立即以書(shū)面形式(實(shí)驗(yàn)報(bào)告)與本公司聯(lián)系,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG

訂購(gòu)信息

單組分訂購(gòu)信息

 

編號(hào)                    名稱(chēng)                   規(guī)格

 

G&VS10023.1     通用型細(xì)胞核形態(tài)/細(xì)胞凋亡檢測(cè)染色試劑盒      100

G&VS10023.1A    清理液(Reagent A                       毫升

 

G&VS10023.1B    反應(yīng)液(Reagent B                   毫升

 

G&VS10023.1C     染色液(Reagent C                    毫升

 

G&VS12024      胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液               毫升

 

G&VS12052       DMEM完quan細(xì)胞培養(yǎng)基                   毫升

 

 

試劑盒訂購(gòu)信息

產(chǎn)品編號(hào)

名稱(chēng)

規(guī)格

G&VS10023.1

通用型細(xì)胞核形態(tài)染色/細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

100

G&VS10023.2

PROPIDIUM IODIDE細(xì)胞核形態(tài)染色/細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

100

G&VS10023.3

CHROMOMYCIN A3細(xì)胞核形態(tài)染色/細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

50

G&VS10023.4

吖啶橙acridine orange細(xì)胞凋亡染色試劑盒

50

G&VS10092.1

HOECHST 33342PROPIDIUM IODIDE細(xì)胞膜變檢測(cè)試劑盒

50

G&VS10092.2

吖啶橙acridine orange和溴化乙錠ethidine bromide雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

50

G&VS10092.3

 吖啶橙Acridine Orange/赫斯特33342HOECHST33342雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

50

G&VS10092.4

 吖啶橙Acridine Orange/碘化丙啶PROPIDIUM IODIDE雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

50

 

原創(chuàng)作者:上海極威生物科技有限公司

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