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極威生物口蹄疫A型抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

點(diǎn)擊次數(shù):852    發(fā)布時(shí)間:2018/8/30 22:55:13

· 上 傳 者: 上海極威生物科技有限公司

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使用說(shuō)明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名:口蹄疫A型抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

英文名:Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A(ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒(注:酶標(biāo)板不可拆)、96T×2/盒(注:酶標(biāo)板一塊可拆、一塊不可拆)

【預(yù)期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,F(xiàn)MDV)引起的偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病,其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發(fā)生水泡和爛斑。

本試劑用于檢測(cè)牛、羊血清中口蹄疫A型抗體,可用于口蹄疫A型疫苗免疫效果評(píng)價(jià)

【原    理】

    本試劑盒系由預(yù)包被口蹄疫A型抗體的酶標(biāo)板、抗體工作液、抗原液酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用阻斷酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)牛、羊血清樣本中口蹄疫A型抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)將稀釋的樣本與抗原液同時(shí)加入酶標(biāo)板中孵育,樣本中的抗體與酶標(biāo)板上的抗體競(jìng)爭(zhēng)抗原,阻斷抗原與板的結(jié)合;經(jīng)洗滌后,再加抗體工作液孵育;經(jīng)洗滌后加入酶標(biāo)記物孵育;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加底物液,與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有口蹄疫A型抗體。

【試劑盒組成】

序號(hào)

名稱

規(guī)格(96T×1)

規(guī)格(96T×2)

1.

酶標(biāo)板

96T×1

96T×2

2.

酶標(biāo)記物  (藍(lán)蓋)

5.5ml×1

11ml×1

3.

抗體工作液 (紅蓋)

5.5ml×1

11ml×1

4.

抗原液 (黑蓋)

5.5ml×1

11ml×1

5.

20X濃縮洗滌液

40ml×1

40ml×2

6.

底物液A  (白蓋)

6ml×1

11ml×1

7.

底物液B  (黑蓋)

6ml×1

11ml×1

8.

終止液  (黃蓋)

6ml×1

11ml×1

9.

陽(yáng)性對(duì)照  (紅蓋)

1.0 ml×1

1.5 ml×1

10.

陰性對(duì)照  (綠蓋)

1.0 ml×1

1.5 ml×1

11.

蓋板膜

1張

2張

12.

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

13.

說(shuō)明書

1份

1份

    

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【儲(chǔ)存及有效期】 2~8℃避光保存,有效期為12個(gè)月。

包被板開封后請(qǐng)于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器 450nm、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長(zhǎng)期需置-20℃保存。

2.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

3.用已稀釋的洗滌液將待檢血清按64倍稀釋(如5μl血清加入315μl洗滌液中,混勻)。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。

3.陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照50μl,樣品孔每孔加入稀釋后的樣品50μl;每孔再加入抗原液50μl(空白孔除外)。

  注:加入抗原后樣本稀釋比例相當(dāng)于1:128。

4.震蕩混勻10秒,置37℃反應(yīng)30分鐘。

5.扣去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,拍干。

6.每孔加抗體工作液50μl(空白孔除外),置37℃反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌,同步驟5。

8.每孔加酶標(biāo)記物50μl(空白孔除外),置37℃反應(yīng)30分鐘。

9.洗滌,同步驟5。

10.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應(yīng)15分鐘。

11.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調(diào)零,于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值(A值)。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陰性對(duì)照A值≥1.0,陽(yáng)性對(duì)照A值≤50%×陰性對(duì)照A值。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1.PI(阻斷率)=(1-樣本A值/陰性對(duì)照孔平均A值)×100%,PI≥50%為陽(yáng)性;PI<50%為陰性。

2.本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)表明待檢樣本中含有口蹄疫A型抗體,且效價(jià)高于1:128,達(dá)到保護(hù)水平。

3.本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果為陰性時(shí)表明待檢樣本中不含有口蹄疫A型抗體,或效價(jià)低于1:128,未達(dá)到充足保護(hù)水平。

4.如需了解樣本抗體的*終效價(jià),可將樣本進(jìn)行梯度稀釋,使PI≥50%的稀釋比例即為該樣本抗體的*終效價(jià)。

【試驗(yàn)方法的局限性】

    該試驗(yàn)僅作為定性牛、羊血清中口蹄疫A型抗體,根據(jù)PI值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以完全溶解。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。

 

 

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