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· 資料簡介: 豬布。Brucellosis)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書 本試劑盒僅供研究使用。 96T 使用目的: 本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中布病(Brucellosis)表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬布。Brucellosis)表達(dá)。用純化的豬布。Brucellosis)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中布。Brucellosis)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的布。Brucellosis)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定標(biāo)本中豬布。Brucellosis)的存在與否。 試劑盒組成 1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 陽性對照 0.5ml×1 瓶 3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 陰性對照 0.5ml×1 瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份 5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張 6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè) 標(biāo)本要求 1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 操作步驟 1. 編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同) 2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻, 3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用 5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。 7. 溫育:操作同 3。 8. 洗滌:操作同 5。 9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘. 10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 計(jì)算和結(jié)果判定: 試驗(yàn)有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10 臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15 陰性判定:樣品 OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為布。Brucellosis)陰性 陽性判定:樣品 OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為布。Brucellosis)陽性 。 注意事項(xiàng) 1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號組分不得混用。 2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 5.底物請避光保存。 6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測時(shí),參考波長為 630nm 7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。 保存條件及有效期 1.試劑盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6 個(gè)月
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