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hFOB 1.19 人 SV40 轉(zhuǎn)染成骨細胞@新聞

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Instruction manual
hFOB 1.19 SV40 轉(zhuǎn)染成骨細胞
Catalogue No.: C022
Product Format: a T25 flask
Culture Properties貼壁
Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application: Cells and cancer research
NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.
Components
Item Specifications
a T25 flask 2X106
Manual 1 copy
Operation steps for cell culture
1. 吸走用于培養(yǎng)基,加入 3-5mL PBS 后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞;
2. 吸干凈 PBS 后加入 1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細胞表
面,培養(yǎng)瓶放 37 度培養(yǎng)箱消化;
(細胞對于消化比較敏感,消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài),導(dǎo)致細胞傳代死亡漂浮或
者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落,可以輕輕吹下時即可終止,禁止
消化到細胞完全漂浮;靹蚣毎麜r盡量輕柔,不要吹出大量氣泡。)
3. 加入 6-8ml 完全培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹下細胞混勻;
4. 將混勻的細胞 1000rpm(約 150g)離心 3min,棄上清,再用新鮮培養(yǎng)基重懸 37 度培
養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng);
傳代比例: 不同細胞生長速度不一,具體傳代比例視細胞生長速度而定,大部分細胞適用
1:3-1:4 傳代,生長較慢的細胞可以 1:2 傳代。
Cell cryopreservation
1.凍存液:92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(可以根據(jù)實驗室條件自行選擇)
2.降溫步驟:4 度 10min,-20 度 2h,-80 過夜后液氮保存。Instruction manual
Tips
1. 細胞經(jīng)過運輸后,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正,F(xiàn)象。貼壁細胞
可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900-1000rpm(約 150g)離心 3min,棄上清。加 5ml
PBS 重懸細胞,再 900-1000rpm(約 150g)離心 3min,用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培
養(yǎng)瓶。第二次 PBS 重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略 PBS 重懸的步
驟;如果碎片很多,建議 PBS 多洗幾次。
2. 細胞生長不均時,可以將細胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
3. 細胞生長緩慢時,可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)(不超過 20%),也可以根據(jù)細胞生長狀態(tài),
選擇傳代細胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
4. 不同細胞貼壁性差異比較大,所以消化時間差別較大,20s-10min 均有可能,具體以細胞消化到
相互分離但未脫落,并可以輕輕吹下為準,嚴禁消化到細胞完全漂浮。客戶消化過度導(dǎo)致細胞死
亡、漂浮、生長緩慢,不提供免費售后服務(wù)。
5. 干冰發(fā)貨均為兩支,客戶先復(fù)蘇一支,若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。
客戶同時復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳,我方不提供免費售后服務(wù)
6. 細胞狀態(tài)正常時,應(yīng)盡快凍存細胞保種,凍存后應(yīng)隨機抽取一支檢測凍存效果。我方不對客戶凍
存細胞導(dǎo)致死亡負責,客戶凍存細胞死亡不提供免費售后服務(wù)。
Notice
客戶收到細胞有任何疑問請及時致電我們,細胞收到后 1 周內(nèi)沒有任何電話,或其他形式回訪,
默認為細胞質(zhì)量沒問題,之后出了任何問題不給予免費售后。細胞免費售后只提供一次,若重發(fā)后再
次培養(yǎng)死亡不再免費補發(fā),細胞收貨時已經(jīng)死亡或密度不足的除外。

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