檢測人Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）的Elisa試劑盒樣本處理要求@市場透露

點(diǎn)擊次數(shù)：667 發(fā)布時(shí)間：2020/11/9 14:23:05

· 上傳者：上海極威生物科技有限公司

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11月9日消息，據(jù)極威生物報(bào)道，檢測人Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）的elisa試劑盒樣本處理要求@市場透露介紹稱，本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人 Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）的含量。 l

有效期：6個(gè)月 l

保存條件：2-8℃ l

本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷

檢測人Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）的Elisa試劑盒樣本處理要求@市場透露，實(shí)驗(yàn)原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成 *終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

檢測人Ⅳ型膠原蛋白（Ⅳ-C）的Elisa試劑盒樣本處理要求@市場透露，樣本處理及要求：

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000 ×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯?于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注：標(biāo)本溶血會(huì)影響*后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。

ELISA試劑盒用戶：ELISA樣本保存有哪些影響？

極威生物解答：樣本的保存：在冰箱中保存過久的標(biāo)本，在間接法ELISA測定中會(huì)導(dǎo)致本底過深、會(huì)造成假陽性；為避免上述問題，在ELISA試劑盒測定血清標(biāo)本時(shí)能新鮮采集；如果不能立即測定，根據(jù)相應(yīng)的時(shí)間保存相應(yīng)的溫度，5 d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)-20℃低溫凍存；如凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。

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