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· 上 傳 者： 上海極威生物科技有限公司
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· 所屬分類：應(yīng)用方法
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· 資料簡介： 產(chǎn)品說明書（中文版） 主要用途 全組織衰老特異性β-半乳糖苷酶原位染色試劑是一種旨在以X-Gal為底物，通過組織內(nèi)β-半乳糖苷酶在酸性條件下穩(wěn)定表達，催化生成深藍色的沉積產(chǎn)物，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到藍色表達的組織細胞分布，作為細胞復(fù)制性衰老（replicative senescence）的分子特征來識別和探測衰老組織的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。廣泛應(yīng)用于細胞生物學(xué)研究。其適用于各種人體和動物活體（in vivo）檢測。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，參數(shù)優(yōu)化，著色敏感。 技術(shù)背景 細胞復(fù)制性衰老是細胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細胞停滯在細胞周期的G1期，表現(xiàn)出細胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，尤其在酸性條件下，細胞內(nèi)β-半乳糖苷酶活性增加，而成為細胞衰老的生物學(xué)標記。全組織（WHOLE MOUNT或EN BLOC）原位染色時間真實反應(yīng)轉(zhuǎn)染效果，組織形態(tài)維持良好，同時后續(xù)使用石蠟切片存檔保存成為可能。 產(chǎn)品內(nèi)容 清理液（Reagent A） 毫升 固定液（Reagent B） 毫升 酸性液（Reagent C） 毫升 稀釋液（Reagent D） 毫升 染色液（Reagent E） 毫升 產(chǎn)品說明書 1份 保存方式 保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀釋液（Reagent D）和染色液（Reagent E），用鋁箔封裹，避免光照；有效保證6月 用戶自備 15毫升錐形離心管：用于配制染色工作液 恒溫培養(yǎng)箱：用于染色孵育 切片儀：用于石蠟或冰凍切片 光學(xué)顯微鏡：觀察染色后的組織細胞 實驗步驟 實驗開始前，將試劑盒里的染色液（Reagent E）從－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀釋液（Reagent D）到15毫升離心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混勻后，置入暗室里，室溫下，標記為染色工作液。然后進行下列操作： 1． 準備1個6孔細胞培養(yǎng)板 2． 放進新鮮切除的動物組織樣本（注意：建議組織大小為0.5厘米厚，1厘米長；如果過大，刀切處理一下） 3． 將組織壓平 4． 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗組織樣本 5． 小心抽去清理液 6． 小心加入xx毫升固定液（Reagent B），浸沒整個組織 7． 在4℃條件下孵育2小時 8． 小心抽去固定液 9． 小心加入xx毫升酸性液（Reagent C），清洗組織樣本 10． 在室溫下孵育15分鐘 11． 小心抽去凈化液 12． 重復(fù)實驗步驟9至11一次 13． 小心加入xx毫升染色工作液，浸沒整個組織 14． 放進37℃培養(yǎng)箱，孵育16小時，避免光照 15． 后續(xù)石蠟切片（6微米厚）或冰凍切片（10微米厚） 16． 在光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù)：表達β- 半乳糖苷酶活性的組織為陽性，呈現(xiàn)藍色 注意事項 1． 本產(chǎn)品為10次（10個樣本）操作 2． 操作時須戴手套 3． 使用時，避免污染母液，否則出現(xiàn)絮狀沉淀，影響實驗效果 4． 原始組織大小可以1厘米厚、2厘米長進行染色，但建議越小越佳 5． 本產(chǎn)品的參數(shù)：固著劑種類和濃度、pH、生色底物的選擇和濃度等達到*優(yōu)化 6． 染色工作液避免光照 7． 用戶根據(jù)實際需求，按比例配制試劑用量 8． 染色孵育過程，避免光照 9． 組織β-半乳糖苷酶活性強，孵育3小時即顯示陽性；組織β-半乳糖苷酶活性弱，則需要孵育24小時 10． 組織染色*長孵育時間為24小時 11． 本產(chǎn)品染色敏感，甚至對于微弱表達的酶活性仍然顯色清晰；用戶可以根據(jù)實際情況調(diào)整孵育時間和染色工作液濃度，使染色恰到好處 12． 孵育時避免液體蒸發(fā) 13． 組織呈現(xiàn)藍色的部位為衰老組織特異性β-半乳糖苷酶活性的地方 14． 全組織染色存在其染色不均勻、組織內(nèi)部染色滲透困難等局限 15． 染色后的后續(xù)處理的切片樣品可以長期保存，同樣須避免光照 16． 本公司提供系列細胞衰老分析試劑產(chǎn)品 上海極威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，主營產(chǎn)品有elisa試劑盒，大鼠elisa試劑盒，小鼠elisa試劑盒，動物血清，細胞株，標準品，生化試劑盒等。 實驗代做服務(wù)有酶聯(lián)免疫ELISA檢測、生化測試、液相氣相檢測、Icp-MS測試、載體構(gòu)建、RACE、全基因合成、線粒體測序、熒光定量PCR、基因克隆、定點突變、染色體步移、基因組全序列獲取、環(huán)境微生物多樣性、微生物基因組測序、微生物菌種鑒定、甲基化分析服務(wù)等。極威生物秉承以產(chǎn)品質(zhì)量為根本，以市場需求為導(dǎo)向，以為客戶創(chuàng)造價值為己任的精神，致力于發(fā)展中國的科研事業(yè)。
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